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论文写作模式-大黄和苍耳子对小鼠肝肾组织
时间:2021-05-19 12:41:22

  大黄是多种蓼科大黄属的多年生植物的合称,也是中药材的名称,具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒等功效。苍耳子,为菊科植物苍耳的干燥成熟带总苞的果实,为历代治疗鼻病及头痛的要药。然而,古代文献记载和现代临床应用都发现苍耳对人体具有一定的毒性作用,毒性直制约着其临床应用。肝脏和肾脏作为人体毒物代谢、转运和清除的主要器官,大黄和苍耳子对二者的毒性损伤尤为受到关注。

  本研究选用6?8周小白鼠35只,雌雄各半,随机分为对照组、大黄组和苍耳子组,对照组5只,其余两组每组15只,将小白鼠编号。大黄组(剂量分别为32g/ml、16g/ml、8g/ml),苍耳子组(剂量分别为10g/ml、4.17g/ml、0.417g/ml),连续灌胃5天,拔眼采血,大黄组取血清测转氨酶(ALT)和γ谷氨酰转肽酶(γ-GT),苍耳子组做血细胞分析;剖杀小鼠做肝脏、肾脏的病理切片来反映小鼠的肝脏和肾脏的毒性反应。

  结果表明灌胃不同剂量的大黄和苍耳子药剂的小鼠的生理反应不同,剂量为8g/ml的大黄和剂量为0.417g/ml的苍耳子的小鼠存活率越高,反应越小,而注射10g/ml剂量的苍耳子的小鼠可能会致死,通过这些可以得出大黄和苍耳子注射剂量越小,其对小鼠肝肾组织的毒性也越小。

  随着科学的进步与发展,人们对中医药的研究越发的深入,而大黄和苍耳子作为常见的中药材,其功效与毒性与人们的日常生活密切相关。大黄的主要成分是蒽醌甙及双蒽酮甙,具有致泄作用,此外,大黄也含有脂肪酸、草酸钙等多种化学成分。苍耳子主要化学成分包括脂肪油、硬脂酸、酚酸及其衍生物、杂环类化合物糖类及其他成分,毒性成分为水溶性苷类化合物中的苍术苷及其衍生物,具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗过敏等功效[1]。

  1.1大黄和苍耳子的发展历史

  大黄是我国从古至今四大中药之一,根据历史书籍记录,早在春秋战国时期中国就开始使用大黄这种药材了,在庚子年汉武帝时间大黄就开始成为商人交易的货物,流往于其他周边国家,在近代以来我国也一直是全球出口大黄的主要外贸大国。而青海出产的大黄又是全国大黄中最为优良的品种,其出产历史悠久,以质量好、产量高、治疗效果好驰名中外。历史上西宁是青海全省生产大黄的聚集地,所以青海大黄又成为“西宁大黄”[2]。

  苍耳子与苍耳药用历史颇为悠久,在很多古文献与历代本草名著中都有记载,苍耳子临床使用历史悠久,药典记载其植物基源为苍耳,也将蒙古苍耳子列为其植物的基本源头,苍耳子种类繁多,品种多样,被广泛分布于世界各个地方,随处可见[3]。

  1.2大黄和苍耳子药材性状的鉴定

  大黄药材样貌多种多样,有圆柱状、圆锥状、卵圆状以及其他不规则性状,除去其外皮,内皮性状有黄色、黄棕色、红棕色等等颜色。在有些大黄去皮后可以看到其外皮上星星点点分布着白色网状纹理,看起来像粗糙的皱纹,绳孔分布也很多。大黄药材质地很坚硬,有极个别的中心松软。其横断面手感粗糙淡,为颗粒性,颜色一般为红棕色或黄棕色。大黄的根部和茎部都比较粗大,尤其是根部生长茂盛,在土地里为放射状生长,无般般点点。熬至大黄可发现其气味清香,但味苦,并有轻微的涩感。咀嚼大黄可发现其有沙粒感并且粘牙。

  苍耳子药材形状较为固定,一般为纺锤状或者是卵圆状,青涩时表面一般为黄绿色,秋季大多为黄棕色。苍耳子外形都有钩刺,顶端有尖刺以及一些微毛。其成熟后质地较为坚韧,刨开苍耳子其横断面有隔膜,将其分为左右两部分。一般干燥的果实才可用药。熬制苍耳子其气味青涩,味苦,不可咀嚼。

  1.3大黄和苍耳子的功效

  大黄始载于《神农本草经》,为药用大黄的干燥根及根茎。其性寒,味苦,归脾胃、肝、大肠、心包经,功效清热凉血、泻火解毒、逐瘀攻积、泻下通便、利湿退黄。临床上,大黄作为常用药物,几千年来对多种疾病均有明显的治疗作用,广泛应用于如内科、外科、妇科、儿科、皮肤科、神经科和五官科等,将其称为“将军”“火参”"绵纹”等[4]。

  苍耳子载于《神农本草经》又名“莫耳实”,属双子的叶植物纲菊科植物。苍耳子为菊科一年,生于植物苍耳的干燥成熟带总苞的果实,为常用的重要药材之一。具有散风除湿,通鼻窦的功效,对于治疗风寒头痛,流鼻涕,风疹瘙痒等有奇效。[5]。苍耳子药性比较温和,尝之较为辛苦。其有毒,一般作用于肺部、肝脏、肾脏等部位。

  1.4大黄和苍耳子的毒性作用

  大黄的药用效果非常广泛,在治疗许多疾病方面有显著的效果,因此大黄经常被人们使用。但是药三分毒,大黄也并不是绝对安全,它在很多方面也具有毒性,尤其是对肝脏,肾脏的毒性作用十分明显。若长时间的使用大黄去治疗疾病极容易对脾胃造成不可逆的伤害长,如果一次大量服用大黄也会引起中毒反应,如恶心、呕吐、头昏、腹痛、腹泻等。大黄还会对人体的免疫力造成损伤,大剂量的服用大黄可能降低胸腺及脾脏指数,通过破坏机体免疫力从使人更容易产生疾病。

  苍耳子的毒性作用主要是因为苍耳子内成分含有毒蛋白、苍耳子油等。若苍耳子药剂中毒,将会导致内脏出血、胃肠粘膜腐蚀、肝脏和肾脏损伤,消化系统受到破坏。并且机体的毛细血管也会受到影响。

  1.5实验依据

  因为肝脏和肾脏有很强大的药酶系统,对很多药物都有滤过作用,不论是西药还是中药,也不论是口服还是注射药物。因此肝脏和肾脏是体内最主要代谢场所。很多药物可以通过观察其对肝脏和肾脏的损伤,从而去判断药物毒性作用的强弱。同时也可以通过血液分析仪器等,看大黄和苍耳子对小鼠的毒性作用[6]。

  1.6本实验的研究内容及目标

  据古文献记录和当代医疗的实际应用都证明大黄和苍耳子对人体具有毒性作用,并且它们的毒性作用也使其不能很好的应用于日常的疾病诊断中。但关于大黄和苍耳子的毒性我们一直不能很好的认识和了解,他们的毒性因素连同作用机理一直未被人们很好的了解。因此,本实验首先通过观察小鼠灌胃大黄和苍耳子药剂的一般状态来确定其对肝脏和肾脏的毒性作用,在对实验小鼠取血做血细胞分析,再采用病理切片进行观察,并对目标成分进行整体动物毒性评价[7]。

  二.材料与方法

  2.1实验材料

  2.1.1实验动物与分组

  本研究选用6?8周小白鼠35只,雌雄参半,(购自山西医科大学)分成3组并编号,其中取5只小鼠为对照组,15只为大黄药剂组,15只为苍耳子药剂组。

  2.1.2实验药材

  大黄、苍耳子、(山西大同第三人民医院)甲醇、乙醇、二甲苯(国药集团化学试剂有限公司)

  2.1.3实验仪器

  表1实验仪器名称及型号

  名称型号厂家

  电子天平BS224北京赛尔利斯仪器有限公司

  恒温水浴锅HH-4上海皓庄仪器有限公司

  血细胞分析仪URIT-2901桂林尤利特医疗电子有限公司

  显微镜MY5010北京普瑞赛司仪器有限公司

  高速离心机HC-2008湖南湘仪仪器有限公司

  生化分析仪rw-7000上海恒科技有限公司

  2.2实验方法

  2.2.1药剂的处理

  制备大黄生品水煎剂,取大黄药材800g,加入适量的水,小火煮沸熬着30分钟后滤出药液,后放入冰箱,灌胃前将其水浴加热即可使用。可将其分为大剂量组:32g/ml;中剂量组:16g/ml;小剂量组:8g/ml。

  制备苍耳子生品的水提取物,首先称取苍耳子生品500克,加适合冷水浸泡,使苍耳子充分吸水,然后开始熬煮30分钟,最后滤出药液,保留药渣。再在滤过的药渣中加入适量的水,煮沸30分钟,滤出药液,保留药渣。同上再进行一次。最后将三次药液到入一起煮沸,浓缩,放置于冰箱中,使用时采用水浴加热,使药液的粘稠度刚好能通过灌胃针头,便于灌胃[8]。可将其分为大剂量组:10g/ml;中剂量组:4.17g/ml;小剂量组:0.417g/ml。

  2.2.2小鼠给药

  实验前小白鼠禁食12小时,不禁水。

  正常对照组:蒸馏水。

  大黄药剂组:将15只小鼠平均分为3组,5只为大剂量组;5只为中剂量组;5只为小剂量组。每天上午下午灌胃,分两次进行,如此连续5天。期间观察小鼠的一般状态如体重、饮食量、摄水量、尿液、粪便、活动和死亡等状况。最后一次灌胃后,小鼠可以自由进食饮水,不受限制。16h后可拔眼采血,所采血液离心后测取血清,测转氨酶(ALT)和γ谷氨酰转肽酶(γ-GT)[9],最后制作小鼠肝脏,肾脏病理切片。

  苍耳子药剂组:将15只小鼠平均分为3组,5只为大剂量组;5只为中剂量组;5只为小剂量组。给每组小鼠灌胃,4小时内时刻关注小鼠的各种生理反应和行动状态。若在观察过程中发生死亡,则立即解刨小鼠,并取其肝脏和肾脏浸泡于福尔马林溶液中,制成病理切片在显微镜下进行观察。若在观察过程中并未发生急性死亡,小鼠可在连续灌胃5天后做摘眼球取血处理,所取血液用血细胞分析仪进行检测分析,分析小鼠白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLD);再制作肝脏,肾脏病理切片。

  2.2.3肝肾组织病理切片的制作

  1、取材与固定

  小鼠连续灌胃5天后采用颈椎脱白处死,解剖后取小鼠肝、肾浸入固定液内,迅速凝固,防止自溶和腐败。常用固定液有甲醇和乙醇,甲醇应配置为中性甲醇,其穿透力强、固定均称、被固定组织不易收缩且具有柔韧性,乙醇具有固定和脱水的双重作用。

  2、脱水透明

  肝肾组织浸泡过固定液后在用浓度逐级升高的乙醇浸泡脱水,然后将其放入透明剂二甲苯中。肝肾组织在二甲苯中的时间不能过长,不然组织容易变性。

  3、浸蜡包埋

  将肝肾组织浸入已融化的石蜡中,待石蜡完全浸入组织后包埋成规整的长方形块状物体,便于切片。

  4、切片

  将包埋好的蜡块切片,切片厚为2?3cm。

  5、脱蜡染色

  将石蜡切片置于二甲苯中脱蜡然后进行冲洗染色,用苏木素伊红液染色[10]。

  2.2.4数据处理

  采用SPSS17.0进行数据处理,结果以平均数±标准差表示,显著性检验采用t检验。

  三.结果与分析

  3.1大黄药剂组的实验结果

  3.1.1一般状况

  小鼠的一般状况随大黄的剂量增加而不断的发生变化,对照组小鼠状态尚可,无异常。大黄小剂量组、大黄中剂量组、大黄大剂量组小鼠的活动状态,精神状态越来越来差,尤其是大黄大剂量组的小鼠更加明显。随着灌胃药剂的逐渐增加,小鼠表现为食欲不振,皮毛变得没有光泽而且上边有污秽,消瘦,眼球颜色暗红,没有光亮。

  3.1.2小鼠ALT及γ-GT的测定

  将大黄小剂量组、大黄中剂量组、大黄大剂量组小鼠拔眼取血,采用rw-7000型生化分析仪检测血清AIT及γ-GT.小鼠ALT及γ-GT随大黄剂量增加而增高,与对照组相比有明显变化。(如表2)

  表2各组实验小鼠ALT及γ-GT结果(x±s)

  组别ALT(IU/L)γ-GT(IU/L)

  正常对照组25.8±3.0 41.0±2.3

  小剂量组53.7±4.1 62.5±4.1

  中剂量组89.2±5.4 91.3±4.3

  大剂量组160.5±7.1 125.2±5.5

  3.1.3肝肾组织观察结果

  大黄中剂量组小鼠肝细胞、肾细胞呈肿胀,脂肪发生变性,肝小叶静脉变窄。而且随剂量增加脂肪变性和管径变窄明显加重,大剂量组小鼠肝细胞出现空泡样改变[11]。

  图1、正常小鼠肾切片图2、灌胃大黄小剂量组小鼠肾切片

  图3、灌胃大黄中剂量组小鼠肾切片图4、灌胃大黄大剂量组小鼠肾切片

  图5、正常小鼠肝脏切片图6、灌胃大黄小剂量组小鼠肝脏切片

  图7、灌胃大黄中剂量组图8、灌胃大黄大剂量组

  小鼠肝脏切片小鼠肝脏切片

  3.2苍耳子药剂组的实验结果

  3.2.1一般状况

  苍耳子组小鼠的一般状况药剂量的增加而不断的发生变化。正常对照组小鼠状态尚可,苍耳子大剂量组小鼠急性死亡情况较多,死亡率为百分之八十。苍耳子中剂量组、小剂量组小鼠灌胃2~3d就会有明显的中毒现象。我们可以明显看到轻微中毒小鼠食欲不振、目光呆滞,精神状态明显不好。苍耳子中剂量组小鼠会留口水、呕吐、腹泻、少尿,苍耳子组大剂量小鼠黏膜黄染、腹泻不止、粪便带血。(如表3)

  表3小鼠毒性反应状况表

  组别死亡情况急毒反应情况

  正常对照组无无

  小剂量组无无

  中剂量组无竖毛,呼吸徐缓,行动迟缓

  大剂量组死亡瞳孔放大,身体剧烈抽搐,口吐白沫

  3.2.2血细胞分析结果

  本研究也尝试从血细胞数据分析结果来评判苍耳子药剂大剂量组、中剂量组、小剂量组的各组的急性毒性指标,比较指标包括白细胞总数(WBC).红细胞总数(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板总数(PLD)[12]。

  苍耳子小剂量组中,4项指标与对照组相比均无显著性差别。与前边描述的苍耳子组小鼠的一般状况变化相匹配。在苍耳子中剂量组时,其与对照组对照也无明显的不同。在苍耳子大剂量组时,变化较大(如表4)

  表4小鼠血细胞分析结果

  分组WBC(/L)RBC(/L)HGB(g/L)PLT(/L)

  对照组2.34±2.05 5.68±1.08 112±25.43 423±152.68

  中剂量组3.18±1.55 6.22±0.70 142±21.35 313±127.55

  小剂量组2.38±0.89 6.05±0.45 159±85.01 343±115.26

  3.2.3肝肾组织观察结果

  通过观察肝肾组织病理切片可知苍耳子对小鼠的肝细胞水肿现象,肾小管水肿现象,肾间质炎细胞浸润现象是普遍存在的[13]。若将苍耳子药剂对小鼠肝、肾毒性作用分成轻度(+),中度(++),重度(+++)三个层次,(如表5)(表6)

  表5肝脏病理观察结果

  组别肝细胞水肿点状坏死灶状坏死炎症

  对照组0 0 0 0

  小剂量组15 65 15 0

  中剂量组0 95 45 45

  大剂量组25 0 0 0

  表6肾脏病理观察结果

  组别肾小管水肿肾间质炎细浸肾小管内渗出肾小管坏死

  对照组0 0 0 0

  小剂量组15 45 45 15

  中剂量组45 65 65 45

  大剂量组0 0 45 0

  图9、正常小鼠肾切片图10、灌胃苍耳子小剂量组小鼠肾切片

  图11、灌胃苍耳子中剂量组图12、灌胃苍耳子大剂量组小鼠肾切片小鼠肾切片

  图13、正常小鼠肝脏切片图14、灌胃苍耳子小剂量组小鼠肝脏切片

  图15、灌胃苍耳子中剂量组图16、灌胃小鼠大剂量组

  小鼠肾切片小鼠肾切片

  从肝肾组织病理切片观察显示4.17g/ml剂量的苍耳就可使小鼠的肝细胞出现水肿,肾小管出现水肿,肾间质被炎细胞浸润等现象,并且随着苍耳子药剂量的加重,其病理反应更加明显。

  四.讨论

  大黄作为最常用的中药而被人们熟知,食其味苦,但有消除炎症,消散体内瘀血,治疗便秘等作用。大黄常做配药与其他药物联合使用,在临床各个方面都有独特的功效[14]。大黄服用的剂量不同,其药理作用和毒理作用也各不相同。根据古典药剂书记载,1g左右的大黄药剂可以止泻,而10g以上的大黄药剂主要作用是通便去火。通过观察小鼠一般状态,我们可以知道如果长期服用或者大剂量的服用大黄药剂会对小鼠造成不良的影响,产生副作用或毒性作用。本实验结果表明剂量为8g/ml的大黄药剂就对小鼠有毒性作用,当剂量为32g/ml的大黄药剂时,小鼠出现了明显的毒性作用。因此在日常生活中我们应该尽可能的少服用大黄药剂,合理利用。

  在日常生活中我们随处可见苍耳这种植物,苍耳子为苍耳的果实,可做药用。苍耳子具有驱除体内的风气和湿气、治疗鼻塞的作用[15]。在很多古书记载中苍耳子是没有毒性作用的,但在临床上苍耳子剂量的改变,也会对小鼠有毒性作用。通过实验我们可以看到小鼠随着苍耳子剂量的加大,一般状态也发生改变。本实验结果表明4.17g/ml剂量的苍耳子开始对小鼠具有毒性作用,当达到10g/ml剂量时,小鼠出现明显的毒性反应。

  中医药材药是中华民族文化源远流长的证明,一直以来为中华民族的繁荣发展做了突出的贡献,也越来越受到全国人们的关注和重视。中医药材通常既含有有用成分也含有有毒成分。本实验通过控制大黄和苍耳子的剂量大小来观察小鼠的生理反应肝肾病理切片等得出大黄和苍耳子剂量越大对肝肾组织器官毒性越大[16]。因此在日常生活中,我们应合理的服用大黄和苍耳子等中药,但具体更加详细的数据,如服用多少剂量的大黄和苍耳子为合适的,不会对肝肾造成损伤,需要进一步进行实验。